Cicatrisation cellulaire in vitro (Scratch Wound Healing assay)

Introduction / Principe

La régénération épidermique est un processus complexe dynamique destiné à restaurer les composants cellulaires et structurels de la peau à travers la mise en place en autres de mécanismes de prolifération et de migration des kératinocytes.

Le suivi de la cicatrisation après blessure du tapis cellulaire est effectué par un automate de microscopie : l’IncuCyte S3 (SARTORIUS). Cet appareil permet de réaliser des cinétiques de la migration cellulaire dans des conditions de culture classiques sous atmosphère contrôlée (37°C ; 5% CO2) en quantifiant la confluence des cellules.                   

Protocole

Format96 puits  
Modèle cellulaire

HaCaT (CLS 300493)

Molécule de référenceFBS
Blessure du tapis cellulaire à confluence avec un WoundMaker (SARTORIUS) après sevrage des cellules
Incubation

48H à 37°C sous 5% CO
possibilité d’adapter le temps d’incubation

AnalyseIncucyte® S3 (SARTORIUS)
→ % Relative Wound Density

Notes :

  • Prévoir 50 µL à 10 mM ou 3 mg d'échantillon pour tester 5 concentrations
    (3 points/concentration)

Recommandation :

  • S'assurer de la solubilité de l'échantillon dans un solvant compatible avec la culture cellulaire

Suivi de la cicatrisation sur des cellules HaCaT