Détection de l'apoptose cellulaire

Introduction

PCBIS propose un essai miniaturisé en microplaque permettant de combiner la détection des effets cytotoxiques et apoptotiques de molécules d’intérêt à partir d’un même échantillon.

Cet essai est pertinent pour la caractérisation de la cytotoxicité de molécules ou d’extraits de plantes.

Principe

Le test CellTiter-Blue (PROMEGA) permet de quantifier la viabilité cellulaire par mesure de la production de résorufine après réduction de la résazurine en réponse à l’activité métabolique des cellules.

 

 

Le signal fluorescent (ex 560 nm / em 590 nm) produit par la résorufine est proportionnel à l’activité métabolique des cellules.
Ne lysant pas les cellules, ce test peut être combiné à d’autres essais pour l’étude de plusieurs paramètres cellulaires.

Le test Apo-One Homogeneous Caspase 3/7 Assay (PROMEGA) permet de quantifier l’activité des Caspases 3/7 caractérisant le processus apoptotique.

 

Le test est basé sur le clivage par les caspases 3/7 du substrat Z-DVED-R110 non fluorescent en Rhodamine 110 fluorescente.
Le signal fluorescent (ex 499 nm /em 521 nm) produit par la Rhodamine 110 est proportionnel à l’apoptose cellulaire

Protocole

Format96 puits  
Modèles cellulairesPlusieurs lignées cellulaires disponibles
Molécules de référenceStaurosporine / Ionomycine
Incubation

24H à 37°C sous 5% CO
possibilité d’adapter le temps d’incubation au modèle biologique

Détection Mesure de fluorescence

Notes :

  • Prévoir 50 µL à 10 mM ou 3 mg d'échantillon pour tester 5 concentrations (3 points/concentration)

Recommandation :

  • S'assurer de la solubilité de l'échantillon dans un solvant compatible avec la culture cellulaire

Caractérisation de la cytotoxicité de la Staurosporine et de l'Ionomycine sur HepG2 (ATCC HB-8065)

Tous les modèles peuvent être adaptés à votre demande.