La détection des seconds messagers intracellulaires comme l’IP1, produit suite à l’activation des récepteurs couplés aux protéines Gq, peut être réalisée par la technologie HTRF®.
La technologie HTRF® (CISBIO) repose sur le principe de base du FRET. Les propriétés des fluorophores utilisés apportent de nombreux avantages.
Il s’agit d’un test de compétition pour la liaison à un anticorps anti-IP1 lié au fluorophore donneur, entre d’une part l’IP1 intracellulaire et d’autre part l’IP1 apporté par le kit fusionné au fluorophore accepteur.
Du LiCl est ajouté dans le tampon de réaction pour permettre l’accumulation de l’IP1 produit dans les cellules.
| Format | 384 puits |
| Modèle cellulaire | HEK293 en suspension possibilité de travailler sur d’autres lignées |
| Distribution des cellules dans la plaque | |
| Stimulation | |
| Incubation | 37°C temps variable en fonction du type cellulaire et du récepteur |
| Ajout des réactifs HTRF | |
| Incubation | 1H à 21°C |
| Détection | Longueur d’onde d’excitation : 337 nm Longueur d’onde d’emission 1 : 665 nm émission du fluorophore donneur Longueur d’onde d’emission 2 : 615 nm émission du fluorophore accepteur |
www.cisbio.com
Notes :
Recommandation :
Cellules : HEK293 surexprimant le récepteur de l'ocytocine
Analyse: S= Signal 665 nm / Signal 615 nm
Tous les modèles peuvent être adaptés à votre demande.