Evaluation des effets cytotoxiques d'un composé sur sphéroïdes uniques

Introduction

PCBIS propose un essai miniaturisé en microplaque sur sphéroïde de cellules de tumeur glioneuronale maligne pour l’évaluation de l’effet cytotoxique de composés. Celui-ci peut être quantifié soit par le suivi de la viabilité des sphéroïdes, soit par le suivi de la croissance des sphéroïdes.

Principe

1. Suivi de la viabilité des sphéroïdes par fluorescence

Le test CellTox-Green (PROMEGA) permet de quantifier la viabilité des sphéroïdes au cours du temps dans des conditions de culture classiques sous atmosphère contrôlée grâce à l’utilisation de l’Incucyte S3 (Essen Bioscience /Sartorius).

Basée sur le principe de la perméabilité membranaire, la cyanine, molécule fluorescente constituant le kit, colore uniquement l’ADN des cellules non viables.                      
Le signal fluorescent (ex 512 nm / em 532 nm) produit par la cyanine est proportionnel à la cytotoxicité cellulaire.
 

2. Suivi de la croissance des sphéroïdes par contraste de phase

La croissance des sphéroïdes est quantifiée en temps réel grâce à l’utilisation de l’Incucyte S3 (Essen Bioscience /Sartorius) qui permet de mesurer l’aire des sphéroïdes.

Protocole

Format96 puits  - plaque à fond rond
Modèle cellulaire

Tumeurs glioneuronales malignes
possibilité de travailler sur d’autres cellules

Molécule de référenceTerfenadine
Incubation

15 heures à 37°C sous 5% CO(suivi de la viabilité par fluorescence)
10 jours à 37°C sous 5% CO(suivi de la croissance par contraste de phase)
possibilité d’adapter le temps d’incubation au modèle biologique

Tests de viabilitéCellTox-Green (PROMEGA) cinétique et/ou CellTiter-Glo (PROMEGA) 1 point
DétectionIncucyte® S3 (SARTORIUS) - contraste de phase / Fluorescence
et/ou mesure de Luminescence

Notes :

  • Prévoir 50 µL à 10 mM ou 3 mg d'échantillon pour tester 5 concentrations (3 points/concentration)

Recommandation :

  • S'assurer de la solubilité de l'échantillon dans un solvant compatible avec la culture cellulaire

 

1. Suivi de la viabilité des sphéroïdes par fluorescence

2. Suivi de la croissance des sphéroïdes par contraste de phase

Tous les modèles peuvent être adaptés à votre demande.