Mesure de la liaison récepteur-ligand par HTRF

Tout comme le FRET, la technologie HTRF (Homogeneous Time Resolved Fluorescence) permet de mesurer la liaison entre un récepteur membranaire fusionné à un fluorophore et un ligand fusionnée à un autre fluorophore.
Elle représente une bonne alternative aux tests FRET ou aux tests radioactifs. Elle permet, entre autres, de s’affranchir de l’auto-fluorescence transitoire des réactifs et consommables qui participent au bruit de fond, en réalisant une mesure décalée dans le temps de 50 à 150 microsecondes par rapport à l’excitation du fluorophore donneur (CISBIO).

La liaison est mesurée sur cellules entières vivantes. Le test est réalisé en conditions homogènes et ne nécessite donc aucun lavage.

Les cellules surexpriment le récepteur fusionné à une étiquette de type SNAP-Tag, CLIP-Tag ou Halo-Tag. Ces étiquettes interagissent de manière covalente avec le dérivé terbium ou europium, utilisés comme fluorophores donneurs.
Les constructions plasmidiques ou les cellules déjà transfectées sont accessibles chez Cisbio International.

Notes :

• Quantité de cellules exprimant le récepteur d’intérêt (lignée transitoire ou stable) à définir lors de la validation du test
• Prévoir 20 µL de ligand marqué en solution à 10 mM dans DMSO

Cellules  : HEK293 surexprimant le récepteur V1A-SNAPTag provenant de chez Cisbio (référence C1PU1V1A)

Ligand fluorescent provenant de chez Cisbio (référence L0003RED), 1 nM

Tous les modèles peuvent être adaptés à votre demande.