Le stress oxydant est un déséquilibre entre la production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) et les capacités cellulaires anti-oxydantes. De ce fait les ROS sont impliquées dans de nombreuses pathologies.
Le dosage de ROS constitue donc une cible biologique pertinente dans la recherche d’actifs anti-oxydants.
La méthode utilisée pour détecter l’activité de ROS intracellulaires est le dosage de l'acétate de 2′,7′-dichlorodihydrofluorescéine (H2DCFDA).
Principe de la mesure du niveau d’activité des ROS à l'aide de la sonde H₂DCFDA [Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1148]
Après diffusion dans la cellule, le H2DCFDA est désacétylé par les estérases cellulaires en H2DCF non fluorescent qui est ensuite oxydé par les ROS en 2′,7′-dichlorofluorescéine (DCF) fluorescente. Ainsi la fluorescence mesurée reflète le niveau d’activité de ROS intracellulaires.
| Format | 96 puits | ||
| Modèle cellulaire | Jurkat (ATCC TIB-152) | ||
| Stimulation | TBHP | ||
| Molécule de référence | Quercetol | ||
| Incubation | 3H à 37°C sous 5% CO2 | ||
| Révélation | H2DCFDA | ||
Notes :
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