Test d'interaction entre macromolécules par AlphaScreen (PERKIN ELMER)

Introduction

La technologie AlphaScreen™ (Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay) , développée par PERKIN ELMER, est basée sur l’utilisation de deux billes complémentaires permettant la production d’un signal luminescent.
Cet essai est homogène et ne nécessite que de faibles quantités de protéines.

Principe

La molécule de phtalocyanime contenue dans la bille donneuse se convertit après excitation à 680 nm en singulet d’oxygène (1O2). Si la bille donneuse est proche de la bille acceptrice (< 200 nm), ce singulet d’oxygène active une cascade de réactions, amenant à la production par la bille acceptrice d’un signal lumineux entre 520 et 620 nm (signal AlphaScreen).

Les billes disponibles peuvent être couplées à de nombreuses molécules permettant la capture de protéines fusionnées à des séquences spécifiques.
Ainsi le signal AlphaScreen est proportionnel à l’interaction protéine-protéine

Protocole

Interaction protéine-protéine  
Format384 puits  
Protéine 1 + Protéine 2 +/- inhibiteur
Conditions de la réaction à définir    
Révélation

Mix billes donneuses/acceptrices
Conditions à définir         

DétectionMesure AlphaScreeen   

                                                                                                                                       

Notes :

  • Prévoir 50 µL à 10 mM ou 3 mg d'échantillon pour tester 5 concentrations
    (3 points/concentration)

Interaction d'une protéine purifiée avec son récepteur en présence d'un inhibiteur

Tous les modèles peuvent être adaptés à votre demande.