Les cytokines, sécrétées par les cellules effectrices du système immunitaire, ont un rôle majeur dans la plupart des maladies inflammatoires chroniques.
Leur dosage constitue donc une cible biologique pertinente dans la recherche d’actifs anti-inflammatoires.
Le dosage de cytokines sécrétées par des cellules mononucléées humaines peut être réalisé par test immuno enzymatique ELISA ou avec la technologie HTRF.
1. Dosage ELISA
Les protéines à doser, liées à un anticorps de capture sont détectées par un complexe biotine-streptavidine couplé à la peroxidase, qui en présence de son substrat permet le développement d’une réaction colorimétrique quantifiée par mesure d’absorbance à 450 nm.
L’absorbance mesurée est proportionnelle à la concentration de la cytokine dosée.
2. Dosage HTRF (CISBIO)
Deux fluorophores partenaires donneur (cryptate d’europium) / accepteur (XL665) sont fusionnés respectivement à un anticorps spécifique de la protéine à doser.
Le transfert d’énergie en temps retardé (TR-FRET) entre le couple de fluorophores est proportionnel à la concentration en cytokine dosée présente dans l’échantillon.
Cet essai est homogène et ne nécessite que de faibles quantités de protéines
| TRAITEMENT | |||
|---|---|---|---|
| Format | 24 ou 96 puits | ||
| Modèle cellulaire | Cellules mononucléées isolées à partir de sang périphérique humain | ||
| Stimulation | LPS ou PHA | ||
| Molécule de référence | Dexamethasone | ||
| Incubation | 24H à 37°C sous 5% CO2 | ||
| REVELATION | |||
| DOSAGE ELISA | DOSAGE HTRF | ||
| Format | 96 puits | 384 puits | |
| Détection | Mesure d'absorbance à 450 nm | Longueur d’onde d’excitation : 337 nm Longueur d’onde d’émission 1 : 615 nm (émission du fluorophore donneur) Longueur d’onde d’émission 2 : 665 nm (émission du fluorophore accepteur) | |
Notes :
Recommandation :
Les dosages du TNF alpha, de l’IL1 beta, de l’IL-6 et de l’IL-8 ont été développés par ELISA.
Les dosages du TNF alpha, de l’IL1 beta, de l’IL-6, de l’IL-8, de l’IL-10 et de l’INF gamma ont été développés par HTRF.
D'autres cytokines peuvent être testées sur demande.